Plásmido CRISPR de Activación (h) BLOS1: sc-406825-ACT

BLOC1S1 codifica BLOS1, una subunidad central del complejo 1 de biogénesis de orgánulos relacionados con lisosomas (BLOC-1), que respalda la clasificación endosomal y el tráfico de carga necesarios para el funcionamiento normal de los orgánulos relacionados con lisosomas. A través de su papel en la maduración de vesículas y la entrega de proteínas de membrana, BLOS1 contribuye a procesos celulares que incluyen el recambio proteico, la homeostasis de orgánulos y la secreción regulada. La alteración de componentes de BLOC-1 se ha vinculado con defectos en las vías de tráfico intracelular, con relevancia para fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, así como con cambios en la biología del sistema inmunitario y de los orgánulos pigmentarios. En consecuencia, BLOC1S1 se estudia con frecuencia en modelos de disfunción endolisosomal y de regulación a nivel de vías del transporte intracelular.

BLOS1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BLOC1S1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BLOS1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BLOC1S1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BLOC1S1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BLOS1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BLOC1S1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BLOS1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BLOS1 en células tumorales con expresión de BLOC1S1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.