Blk Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402737-ACT

BLK codifica a tirosina quinase linfoide B (Blk), uma quinase não recetora da família Src expressa predominantemente em células B, onde acopla o recetor de células B às redes de sinalização a jusante. A Blk participa em cascatas de fosforilação que modulam a atividade das vias PI3K–AKT, MAPK/ERK e NF-κB, influenciando os limiares de ativação dependentes de antigénio, a proliferação e a diferenciação. Alterações na expressão de BLK ou variações regulatórias têm sido associadas a desregulação imunitária e suscetibilidade a fenótipos autoimunes, tornando-o um nó útil para dissecar o circuito de sinalização das células B. O BLK humano também é estudado no contexto da biologia das linhagens hematopoiéticas e dos programas transcricionais que governam o desenvolvimento das células B.

Blk O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BLK sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Blk O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BLK em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BLK, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Blk. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BLK nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Blk no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Blk em células tumorais com expressão de BLK silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.