Bex1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404292-ACT

BEX1（brain expressed X-linked 1）はBex1タンパク質をコードしており、Bex1は神経組織に豊富に存在する内在的無秩序タンパク質（IDP）で、アダプター様因子として転写プログラムやシグナル伝達を調節し、神経細胞の分化、生存、ならびにストレス応答に関与します。Bex1は、神経栄養因子シグナルやMAPK/ERK関連プロセスなどの経路との相互作用を通じて、細胞周期の進行やアポトーシスの制御に関与すると示唆されており、増殖と分化に対する影響は状況依存的です。BEX1発現の変化は複数の腫瘍種で報告されているほか、神経発生および神経変性の研究でも取り上げられており、系譜（ライン）特異化や細胞可塑性の研究におけるマーカー、ならびに機構的ハブとしての有用性が支持されています。これらの性質から、BEX1は分化状態と増殖制御を結びつける遺伝子制御ネットワークを解明する上で重要です。

Bex1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BEX1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Bex1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BEX1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBEX1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Bex1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBEX1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBex1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBEX1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBex1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。