BETA 3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-425594-ACT-2

O gene murino Bhlhe22 codifica o fator de transcrição de hélice‑alça‑hélice básica (bHLH) BETA3, um regulador da diferenciação e maturação neuronal que ajuda a moldar programas de expressão gênica durante o desenvolvimento do sistema nervoso central. O BETA3 modula redes transcricionais ligadas à especificação do destino celular, ao crescimento de neuritos e à organização sináptica por meio da ligação ao DNA mediada por bHLH e da interação com vias de sinalização do desenvolvimento que coordenam transições de progenitores para neurônios. Alterações na atividade de Bhlhe22 têm sido associadas na literatura à desorganização de circuitos corticais e a fenótipos do neurodesenvolvimento, tornando-o relevante para o estudo de mecanismos subjacentes ao desenvolvimento cerebral e à biologia de doenças neurológicas. A edição gênica de Bhlhe22 em modelos murinos permite a investigação funcional de decisões de linhagem, montagem de circuitos e mudanças transcriptômicas a jusante em neurônios primários, organoides ou em contextos de desenvolvimento in vivo.

BETA 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Bhlhe22 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BETA 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Bhlhe22 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Bhlhe22, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BETA 3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Bhlhe22 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BETA 3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BETA 3 em células tumorais com expressão de Bhlhe22 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.