BCMA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403058-ACT

O TNFRSF17 codifica o antígeno de maturação de células B (BCMA), um membro da superfamília de receptores de TNF expresso predominantemente em células B em estágio avançado e em plasmócitos. O BCMA atua como receptor para APRIL (TNFSF13) e BAFF (TNFSF13B), acoplando a ligação do ligante a programas de sinalização de sobrevivência relacionados ao NF-κB, que sustentam a diferenciação de plasmócitos, a produção de imunoglobulinas e a imunidade humoral de longa duração. A sinalização e a expressão desreguladas de BCMA estão intimamente associadas à homeostase aberrante de plasmócitos e são frequentemente estudadas no contexto do mieloma múltiplo e de outras neoplasias da linhagem B. Por ser um receptor restrito à linhagem, o BCMA também é usado como uma ferramenta molecular para investigar a biologia dos plasmócitos, a regulação imune e as interações entre o tumor e o microambiente.

BCMA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFRSF17 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BCMA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFRSF17 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFRSF17, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BCMA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFRSF17 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BCMA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BCMA em células tumorais com expressão de TNFRSF17 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.