BCMA Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403058-ACT

TNFRSF17 codifica l’antigene di maturazione delle cellule B (BCMA), un membro della superfamiglia dei recettori del TNF espresso prevalentemente nelle cellule B in fase tardiva e nelle plasmacellule. BCMA funge da recettore per APRIL (TNFSF13) e BAFF (TNFSF13B), collegando il legame del ligando all’attivazione di NF-κB e di programmi di segnalazione di sopravvivenza correlati, che supportano la differenziazione delle plasmacellule, la produzione di immunoglobuline e un’immunità umorale di lunga durata. La deregolazione della segnalazione e dell’espressione di BCMA è strettamente associata a un’omeostasi aberrante delle plasmacellule ed è frequentemente studiata nel contesto del mieloma multiplo e di altre neoplasie della linea B. In quanto recettore ristretto alla linea, BCMA viene anche utilizzato come strumento molecolare per investigare la biologia delle plasmacellule, la regolazione immunitaria e le interazioni tumore–microambiente.

BCMA Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TNFRSF17 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BCMA Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TNFRSF17 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TNFRSF17, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BCMA. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TNFRSF17 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BCMA nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BCMA nelle cellule tumorali con espressione di TNFRSF17 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.