BCAM Double Nickaseプラスミド (h): sc-405080-NIC

BCAM（basal cell adhesion molecule、基底細胞接着分子）は、ルターン血液型糖タンパク質としても知られ、基底膜に存在するラミニンα5への接着を媒介する細胞表面の免疫グロブリンスーパーファミリー分子です。細胞外マトリックスや細胞骨格アダプターとの相互作用を通じて、BCAMは細胞―マトリックス接着、細胞移動、ならびに上皮・内皮の組織化を形作る機械的シグナル伝達に影響を与えます。その発現量や糖鎖修飾状態は、血管内および炎症性細胞のトラフィッキングを調節し、状況に依存した組織の健全性変化に寄与し得ます。BCAM活性の変化は、赤血球の接着現象、腫瘍細胞の浸潤能、さらに血液腫瘍および固形腫瘍の生物学に関連する微小環境リモデリングとの関連で研究されています。

BCAM ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BCAM 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BCAM内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BCAMの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BCAMが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。