BBS4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403421-NIC

BBS4はBBSome（複数のタンパク質からなる複合体）の中核構成因子をコードしており、繊毛膜タンパク質の輸送を仲介するとともに、一次繊毛の形成および維持を支えます。BBS4は繊毛内輸送（IFT）機構と協調することで、Hedgehog（ヘッジホッグ）をはじめとする受容体介在性カスケードなど、繊毛依存的なシグナル伝達経路に寄与し、細胞極性、感覚情報の伝達、発生パターニングの形成に影響を与えます。BBS4機能の破綻は繊毛形成（ciliogenesis）を障害し、繊毛シグナルの動態を変化させることから、本遺伝子はバルデー・ビードル症候群（Bardet–Biedl syndrome）およびより広い繊毛病（ciliopathy）関連表現型と結び付けられています。そのためBBS4は、中心体／基底小体の生物学、小胞輸送、ならびに繊毛制御下にある代謝・神経発達プロセスの文脈で広く研究されています。

BBS4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BBS4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BBS4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BBS4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BBS4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。