Plásmido Doble Nickase (h) BBS2: sc-404725-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)BBS2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa BBS2 (h) y el plásmido de doble nickasa BBS2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a BBS2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BBS2 Anticuerpo (A-12): sc-365355
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) BBS2 | sc-404725-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) BBS2 | sc-404725-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BBS2 codifica un componente central del BBSoma, un complejo multiproteico necesario para el ensamblaje del cilio primario y para el tráfico selectivo de receptores de membrana y proteínas de señalización hacia el interior y el exterior del cilio. A través de su papel en el transporte ciliar, BBS2 influye en vías clave dependientes de los cilios, incluida Hedgehog y otras cascadas de señalización sensorial que coordinan la homeostasis celular y el desarrollo tisular. La alteración de la función de BBS2 se asocia con el síndrome de Bardet–Biedl y fenotipos de ciliopatía relacionados, por lo que es un objetivo ampliamente utilizado para estudiar los mecanismos de la disfunción ciliar. En modelos celulares humanos, la perturbación de BBS2 permite analizar la localización de receptores, la dinámica del transporte vesicular y las respuestas transcripcionales aguas abajo asociadas a una señalización ciliar alterada.
BBS2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BBS2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BBS2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BBS2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BBS2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.