BAT2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409707-ACT

PRRC2AはヒトBAT2タンパク質をコードしており、BAT2はプロリンに富む大型のRNA結合因子として、mRNAの安定性や翻訳制御を含む転写後遺伝子制御に関与すると考えられています。BAT2はストレス応答性のRNA代謝や、細胞の増殖・分化に影響するより広範な遺伝子発現プログラムの制御とも関連づけられています。PRRC2A/BAT2座位における遺伝的多型や発現異常は、免疫関連形質やがん関連ゲノム領域で報告されており、炎症シグナルや腫瘍生物学を形作る経路との関連性を支持しています。これらの特徴により、PRRC2AはRNA制御ネットワークと、その下流にある細胞表現型への影響を解明するための有用な標的となります。

BAT2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PRRC2Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BAT2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PRRC2A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPRRC2A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BAT2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPRRC2A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBAT2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPRRC2A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBAT2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。