BAF53B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409940

Panoramica

ACTL6B codifica BAF53B, una subunità proteica correlata all’actina dei complessi di rimodellamento della cromatina dipendenti da ATP SWI/SNF (BAF), arricchiti nei neuroni, che regolano il posizionamento dei nucleosomi e l’accessibilità della cromatina. BAF53B sostiene i programmi trascrizionali necessari alla differenziazione neuronale, alla maturazione dendritica e sinaptica e alla regolazione genica dipendente dall’attività, coordinandosi con altri componenti BAF per modulare l’utilizzo di enhancer e promotori. Attraverso queste funzioni epigenetiche, ACTL6B è collegato a vie che controllano la tempistica dello sviluppo neurobiologico, la connettività neuronale e la plasticità. Alterazioni genetiche e funzionali di ACTL6B/BAF53B sono state associate a disturbi del neurosviluppo e a stati di espressione genica neuronale alterati, rilevanti per modelli di fenotipi cognitivi e comportamentali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BAF53B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ACTL6B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ACTL6B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ACTL6B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BAF53B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ACTL6B per lo studio della segnalazione di BAF53B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ACTL6B critici per la funzione di BAF53B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ACTL6B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BAF53B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal BAF53B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ACTL6B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BAF53B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR BAF53B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ACTL6B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ACTL6B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.