Plasmide Double Nickase (h) BACH1: sc-401047-NIC

BACH1 (BTB and CNC homology 1) code un facteur de transcription sensible à l’hème, qui forme des hétérodimères avec de petites protéines MAF afin de réprimer les gènes contrôlés par l’élément de réponse antioxydant (ARE), notamment des composants du catabolisme de l’hème et de la défense contre le stress oxydant. En intégrant la disponibilité de l’hème au maintien de l’homéostasie rédox, BACH1 module la fonction mitochondriale, le métabolisme du fer et les réponses cellulaires aux espèces réactives de l’oxygène, en s’articulant avec la signalisation NRF2/KEAP1 et des programmes transcriptionnels d’adaptation au stress. Une activité dérégulée de BACH1 a été associée à une tolérance modifiée au stress oxydant, à la signalisation inflammatoire et à des changements des états de prolifération et de différenciation dans de multiples contextes cellulaires pertinents pour les maladies. Ces propriétés font de BACH1 un nœud utile pour des études mécanistiques de la transcription régulée par le rédox, de l’adaptation métabolique et des réseaux géniques induits par le stress.

BACH1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BACH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BACH1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BACH1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BACH1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.