B7-H4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-416865

概要

VTCN1はB7-H4（V-set domain containing T cell activation inhibitor 1）をコードしており、B7ファミリーに属する免疫チェックポイントリガンドとしてT細胞の増殖およびサイトカイン産生を抑制し、末梢免疫の制御に寄与します。B7-H4は骨髄系細胞および上皮系の環境で誘導され、腫瘍微小環境における抗原提示、炎症シグナル、免疫回避プログラムに影響を及ぼします。VTCN1の発現異常は複数の固形腫瘍で報告されており、抗腫瘍免疫活性の低下と関連するほか、マクロファージの分極やT細胞活性化の閾値を制御する経路とも交差します。これらの特性により、VTCN1は、がんや慢性炎症モデルに関連する抑制性共刺激シグナルネットワークおよび免疫制御機構を解析するうえで有用な標的となります。

B7-H4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVTCN1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VTCN1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VTCN1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、B7-H4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、B7-H4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VTCN1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• B7-H4の機能に不可欠なVTCN1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VTCN1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• B7-H4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびB7-H4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VTCN1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  B7-H4 HDRプラスミド（h）および B7-H4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVTCN1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVTCN1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。