AVP Receptor V2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403177-ACT

O AVPR2 codifica o receptor humano 2 de vasopressina arginina (Receptor V2 de AVP), um receptor acoplado à proteína G predominantemente ligado à Gs, que ativa a adenilil ciclase e eleva o cAMP intracelular. A sinalização via cAMP/PKA regula programas de fosforilação e tráfego que influenciam a permeabilidade à água em epitélios e a localização de proteínas de membrana, integrando-se a processos mais amplos de dessensibilização de GPCRs e de reciclagem endocítica. A atividade do AVPR2 é central em vias responsivas à vasopressina e serve como um sistema modelo para estudar a dinâmica da sinalização de receptores, a regulação por segundos mensageiros e respostas transcricionais dependentes de ligante. Variações genéticas ou expressão desregulada de AVPR2 têm sido associadas a fenótipos alterados de balanço hídrico e a defeitos de dobramento/tráfego do receptor, fornecendo ligações mecanísticas com distúrbios da função de concentração renal.

AVP Receptor V2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AVPR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AVP Receptor V2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AVPR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AVPR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AVP Receptor V2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AVPR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AVP Receptor V2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AVP Receptor V2 em células tumorais com expressão de AVPR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.