AVP Receptor V1a Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401691-ACT

AVPR1A codifica o recetor humano de vasopressina arginina 1A (V1a), um GPCR de sete domínios transmembrana que se acopla predominantemente a Gq/11 para ativar a fosfolipase C, a sinalização por fosfatos de inositol, a mobilização de Ca²⁺ intracelular e programas transcricionais dependentes de PKC. A sinalização via V1a influencia o tónus do músculo liso vascular, as respostas plaquetárias e endoteliais e circuitos neuroendócrinos que regulam a reatividade ao stress e o comportamento social, integrando-se com MAPK/ERK e outras vias a jusante. Alterações na expressão ou na sinalização de AVPR1A têm sido investigadas em contextos de investigação cardiovascular e neuropsiquiátrica, incluindo a regulação da pressão arterial, fenótipos vasoconstritores e estudos de associação com traços comportamentais. Estas ligações tornam o AVPR1A um alvo útil para dissecar a transdução de sinal de GPCR e a biologia do eixo da vasopressina em modelos celulares.

AVP Receptor V1a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AVPR1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AVP Receptor V1a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AVPR1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AVPR1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AVP Receptor V1a. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AVPR1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AVP Receptor V1a no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AVP Receptor V1a em células tumorais com expressão de AVPR1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.