ATP5F1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405710-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ATP5F1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ATP5F1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ATP5F1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATP5F1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ATP5F1: sc-514419
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ATP5F1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405710-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATP5F1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405710-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP5F1 codiert den katalytischen Kern der mitochondrialen F1F0-ATP-Synthase (Komplex V), eines Schlüsselenzyms, das die oxidative Phosphorylierung mit der ATP-Produktion über die innere Mitochondrienmembran koppelt. Indem ATP5F1 die protonenmotorische Kraft in zelluläres ATP umwandelt, unterstützt es energieabhängige Prozesse wie die Ionhomöostase, Biosynthese und Stressanpassung und ist mit der Aktivität der Elektronentransportkette sowie der Kontrolle des mitochondrialen Membranpotentials verknüpft. Störungen der ATP-Synthase-Funktion werden mit mitochondrialer Dysfunktion, veränderter Handhabung reaktiver Sauerstoffspezies und metabolischer Reprogrammierung in Verbindung gebracht, was das Überleben und die Proliferation von Zellen beeinflussen kann. Als zentraler Knotenpunkt der Bioenergetik wird ATP5F1 häufig im Kontext neuromuskulärer und neurodegenerativer Phänotypen sowie mitochondrialer Beiträge zum Stoffwechsel von Krebszellen untersucht.
ATP5F1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATP5F1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATP5F1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATP5F1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATP5F1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.