ATP-citrate synthase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430516

Visão geral

O gene **Acly** em camundongo codifica a **ATP-citrato sintase (ACLY)**, uma enzima citosólica que converte citrato e CoA em **acetil‑CoA** e **oxaloacetato**, conectando o fluxo de carbono mitocondrial ao metabolismo citoplasmático. Ao fornecer acetil‑CoA para a síntese *de novo* de ácidos graxos e colesterol, a ACLY sustenta a lipogênese e a biogênese de membranas, além de contribuir para os reservatórios de acetil‑CoA usados na acetilação de proteínas e histonas. Essa atividade integra a detecção de nutrientes a vias que controlam o acoplamento entre glicólise e ciclo do TCA, a homeostase lipídica e a regulação epigenética da expressão gênica. A produção desregulada de acetil‑CoA dependente de ACLY tem sido associada a alterações no remodelamento metabólico, na sinalização inflamatória e em fenótipos relacionados à proliferação em modelos relevantes para doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ATP-citrate synthase (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Acly em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Acly, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Acly na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ATP-citrate synthase.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Acly para a investigação da sinalização de ATP-citrate synthase, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Acly críticos para a função ATP-citrate synthase
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Acly para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ATP-citrate synthase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo ATP-citrate synthase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Acly. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ATP-citrate synthase Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR ATP-citrate synthase (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Acly para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Acly definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.