ATGL CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-426224

概要

マウスのPnpla2は、脂肪組織トリグリセリドリパーゼ（ATGL）をコードしており、細胞質におけるトリグリセリド加水分解を開始してジアシルグリセロールと遊離脂肪酸を産生し、ミトコンドリアβ酸化や脂質シグナル伝達に供給する主要な律速酵素である。ATGL活性は、脂肪分解とエネルギー恒常性の協調を担い、脂質滴のターンオーバー、PPAR介在性の転写プログラム、ならびにインスリン応答性の代謝経路と連携する。ATGL依存性の脂肪分解が攪乱されると、細胞内の脂質貯蔵や脂肪酸フラックスが変化し、Pnpla2は代謝活性の高い組織における脂質代謝異常やストレス応答と関連づけられる。これらの特性により、ATGLは脂質滴生物学、栄養感知、代謝リモデリングの機構研究において広く用いられる標的となっている。

ATGL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPnpla2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pnpla2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pnpla2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ATGLタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ATGLシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pnpla2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ATGLの機能に不可欠なPnpla2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pnpla2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ATGL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびATGL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pnpla2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ATGL HDRプラスミド（m）および ATGL HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPnpla2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPnpla2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。