ATGL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401711-ACT

PNPLA2は、細胞質の脂肪滴に貯蔵されたトリアシルグリセロールの初期加水分解を担う律速酵素である脂肪組織トリグリセリドリパーゼ（ATGL）をコードし、ジアシルグリセロールと遊離脂肪酸を産生して、ミトコンドリアのβ酸化および細胞のエネルギー恒常性に供給します。ATGL活性は、PPAR駆動性の転写プログラムや、ABHD5/CGI-58のような補因子による脂肪分解制御、G0S2のような阻害タンパク質を含む、栄養感知・代謝シグナル伝達ネットワークと脂肪滴動態を統合します。PNPLA2の発現異常またはATGL機能の破綻は、中性脂肪のターンオーバーと脂肪酸フラックスを攪乱し、脂肪組織、肝臓、心臓、骨格筋にわたって観察される脂質貯蔵の変化、脂質毒性ストレス、代謝表現型に寄与します。中性脂質分解の中心的ノードとして、PNPLA2/ATGLは脂質貯蔵病モデル、インスリン抵抗性に関連する経路、栄養欠乏に対する細胞応答の研究で広く用いられています。

ATGL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PNPLA2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ATGL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PNPLA2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPNPLA2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ATGLの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPNPLA2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるATGL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPNPLA2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるATGL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。