Plasmide Double Nickase (m) ATF-6α: sc-432646-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) ATF-6α correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ATF-6α Double Nickase (m) et le plasmide ATF-6α Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Atf6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ATF-6α Antibody (F-7): sc-166659
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) ATF-6α | sc-432646-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) ATF-6α | sc-432646-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le facteur activateur de transcription 6 (Atf6) code ATF-6α, un facteur de transcription bZIP transmembranaire résidant dans le RE, qui constitue un capteur majeur de l’accumulation de protéines mal repliées. Lors d’un stress du RE, ATF-6α est transporté vers l’appareil de Golgi où il subit une protéolyse intramembranaire régulée, libérant un fragment nucléaire qui induit des programmes transcriptionnels contrôlant la protéostasie, notamment les chaperonnes du RE, les composants de la dégradation associée au RE (ERAD) et des gènes du métabolisme lipidique. ATF-6α agit au sein de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) aux côtés des voies IRE1/XBP1 et PERK/eIF2α afin de rétablir l’homéostasie du RE et de coordonner un remodelage adaptatif. Une activité d’ATF6 dérégulée a été associée à des mécanismes pathologiques liés au stress chronique du RE, notamment des dysfonctionnements métaboliques, des processus neurodégénératifs et des phénotypes cardiovasculaires, faisant d’Atf6 une cible largement utilisée pour des études mécanistiques de la signalisation du stress.
ATF-6α Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Atf6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Atf6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Atf6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Atf6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.