Asporin Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-426152-LAC

Aspn codifica a asporina, um pequeno proteoglicano secretado rico em leucina, enriquecido na matriz extracelular (MEC), onde modula a fibrilogênese do colágeno e a biomecânica dos tecidos. A asporina pode ligar-se a fatores de crescimento e regular a sua sinalização, incluindo vias da família TGF-β, influenciando assim a diferenciação de condrócitos, a ativação de fibroblastos e a remodelação da matriz. Em modelos murinos, alterações na expressão de Aspn são frequentemente analisadas no contexto da homeostase da cartilagem, do desenvolvimento esquelético e da manutenção do tecido conjuntivo. A desregulação da organização da MEC e a sinalização aberrante de TGF-β associadas à biologia da asporina são relevantes para estudos mecanísticos de alterações degenerativas articulares, da remodelação associada à fibrose e das interações tumor–estroma.

As Partículas de Ativação Lentivirais Asporin (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Aspn numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Asporin (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Aspn, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Asporin. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Aspn e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.