ASIC2 Double Nickase Plasmid (h): sc-403265-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ASIC2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ASIC2 Double-Nickase-Plasmid (h) und ASIC2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ASIC2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ASIC2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403265-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ASIC2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403265-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ASIC2 (acid-sensing ion channel subunit 2) kodiert einen protonengesteuerten, amiloridempfindlichen Kationenkanal der DEG/ENaC-Familie, der zur neuronalen Erregbarkeit und Membrandepolarisation als Reaktion auf eine extrazelluläre Azidifizierung beiträgt. In menschlichen Zellen kann ASIC2 mit anderen ASIC-Untereinheiten assemblieren, um Ionenselektivität, Desensibilisierungskinetik und pH-Empfindlichkeit zu modulieren, wodurch lokale pH-Verschiebungen mit einem Ca2+/Na+-Einstrom und nachgeschalteter Signalübertragung verknüpft werden. Die ASIC2-Aktivität überschneidet sich mit Prozessen wie synaptischer Transmission, Mechanosensation und der Wahrnehmung inflammatorischer Mikroumgebungen, in denen der extrazelluläre pH-Wert schwankt. Eine veränderte ASIC2-Expression oder Kanalfunktion wurde in der Neurophysiologie und der schmerzbezogenen Signalübertragung untersucht und ist für die Forschung zu neuronalen Stressantworten und exzitotoxischen Signalwegen relevant.
ASIC2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ASIC2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ASIC2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ASIC2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ASIC2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.