ARL3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-416856-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ARL3 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ARL3ダブルニカースプラスミド（h）およびARL3ダブルニカースプラスミド（h2）は、ARL3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ARL3 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-416856-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ARL3 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-416856-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARL3は、ADPリボシル化因子様GTPアーゼ3（ARL3）をコードしており、GDP結合型とGTP結合型の間を循環する小型の制御性GTPアーゼとして、繊毛および光受容体における輸送を調整します。一次繊毛では、ARL3はARL13Bと協調し、ARL13BのGEF活性によって、UNC119やPDE6Dなどのキャリアを介した脂質修飾カーゴの放出と標的化を制御し、微小管に基づく輸送や繊毛膜の組成維持を支えます。これらの過程を通じて、ARL3は繊毛形成、シグナル伝達、ならびにプレニル化タンパク質やミリストイル化タンパク質の区画化に寄与します。ARL3依存的な輸送の制御異常は、遺伝性網膜変性を含む繊毛関連の表現型や、神経発生および感覚生物学に関係するより広範な繊毛病（ciliopathy）関連機構と結び付いています。
ARL3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ARL3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ARL3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ARL3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ARL3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。