Plasmide CRISPR d'Activation (h) ARID2: sc-401863-ACT

ARID2 code une sous-unité du complexe PBAF (SWI/SNF) de remodelage de la chromatine dépendant de l’ATP, contenant un domaine d’interaction riche en AT, qui régule le positionnement des nucléosomes et les programmes transcriptionnels. En coordonnant l’accessibilité des enhancers et des promoteurs, ARID2 influence la spécification des lignages, les réponses aux dommages de l’ADN et les états de différenciation cellulaire. Une activité d’ARID2 altérée a été associée à une dérégulation du contrôle épigénétique et de réseaux transcriptionnels impliqués dans la tumorigenèse et d’autres maladies caractérisées par une régulation anormale de la chromatine. En tant que composant du remodelage de la chromatine, ARID2 est couramment étudié dans des voies gouvernant la stabilité du génome, la régulation des gènes stimulés par l’interféron et le contrôle, dépendant du contexte, du cycle cellulaire et de l’apoptose.

ARID2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARID2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ARID2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARID2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARID2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ARID2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARID2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ARID2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ARID2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ARID2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.