ArgRS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430545

Panoramica

Il gene murino Rars codifica l’arginil-tRNA sintetasi (ArgRS), una aminoacil-tRNA sintetasi citosolica fondamentale che lega l’arginina al suo tRNA cognato per sostenere una traduzione accurata e l’omeostasi del proteoma. Controllando la disponibilità di tRNA^Arg carico, ArgRS influenza la fedeltà della traduzione, le risposte allo stress legate alla disponibilità di amminoacidi e gli effetti a valle su programmi di crescita e differenziamento cellulare. Alterazioni della funzione delle aminoacil-tRNA sintetasi sono state associate a fenotipi di tipo neuroevolutivo e neuromuscolare, a disregolazione immunitaria e a difetti proliferativi, rendendo Rars un nodo rilevante per indagare come perturbazioni legate alla traduzione rimodellino gli stati cellulari. Nei modelli murini, la perturbazione di Rars offre una via diretta per interrogare la funzione di un gene essenziale, le reti compensatorie delle tRNA sintetasi e la sensibilità dipendente dal contesto allo stress della proteostasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ArgRS (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rars in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rars insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rars a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ArgRS.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rars per lo studio della segnalazione di ArgRS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rars critici per la funzione di ArgRS
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rars per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ArgRS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ArgRS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rars. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ArgRS Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ArgRS (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rars per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rars definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.