ARG-Vasopressin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403139-ACT

AVP kodiert für Arginin-Vasopressin, ein neurohypophysäres Peptidhormon, das als Präprohormon synthetisiert und anschließend prozessiert wird, um den systemischen Wasserhaushalt, den Gefäßtonus und die neuroendokrine Homöostase zu regulieren. Über die AVPR2-Signalübertragung in Hauptzellen der renalen Sammelrohre fördert Vasopressin eine cAMP/PKA-abhängige Translokation von Aquaporin-2 zur apikalen Membran und koordiniert so antidiuretische Antworten; AVPR1A-vermittelte Signalwege tragen zur Vasokonstriktion und zu einer breiteren, stressresponsiven Signalgebung bei. Eine AVP-assoziierte Fehlregulation ist relevant für Störungen der Osmoregulation und der Blutdruckkontrolle, einschließlich des zentralen Diabetes insipidus und einer inadäquaten Antidiurese, und wird aufgrund der Expressionsmuster im ZNS auch in neuropsychiatrischen und verhaltensbezogenen Kontexten untersucht. Als streng reguliertes hypothalamisches Gen dient AVP als Modell für stimulusabhängige Transkription, Peptidprozessierung und die Biologie sekretorischer Signalwege.

AVP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AVP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

AVP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AVP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AVP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen AVP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AVP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von AVP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des AVP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AVP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.