Plasmide Double Nickase (m) ARA70: sc-424185-NIC

Le gène murin **Ncoa4** code **ARA70**, un coactivateur des récepteurs nucléaires qui module la transcription dépendante du ligand en interagissant avec le récepteur des androgènes et des complexes de récepteurs nucléaires apparentés. ARA70 influence des programmes transcriptionnels associés à la chromatine qui régulent la prolifération, la différenciation et le métabolisme cellulaires, en intégrant des signaux issus des voies des hormones stéroïdes et des co‑régulateurs. NCOA4 participe également à l’homéostasie du fer via la ferritinophagie, en s’associant à la machinerie d’autophagie dirigée par NCOA4 pour acheminer la ferritine vers les lysosomes, reliant ainsi la biologie des récepteurs nucléaires à l’autophagie et aux réponses au stress oxydatif. Le dérèglement de ces processus a été associé à une altération de la signalisation hormonale, à une vulnérabilité cellulaire dépendante du fer et à des phénotypes pertinents dans des contextes de recherche sur la biologie du cancer et la neurodégénérescence.

ARA70 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ncoa4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ncoa4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ncoa4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ncoa4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.