Aquaporin 1/AQP1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400340-LAC

A AQP1 humana codifica a aquaporina 1, um canal de água tetramérico de membrana que permite o rápido transporte osmótico de água através das membranas plasmáticas e de barreiras especializadas. A AQP1 contribui para a homeostase de fluidos e para a permeabilidade microvascular, integrando-se a processos como o transporte endotelial, a regulação do volume celular e o equilíbrio de fluidos nos tecidos. Para além do fluxo de água, a AQP1 tem sido associada, em determinados contextos, à migração celular e a comportamentos angiogénicos, ligando a atividade do canal à dinâmica do citoesqueleto e às interações com o microambiente extracelular. A expressão ou a localização desregulada da AQP1 foi relatada em perturbações que envolvem manuseamento anómalo de fluidos e disfunção da barreira vascular, sustentando a sua utilidade como alvo de investigação em biologia relacionada com edema, fisiologia renal e pulmonar e estudos do microambiente tumoral.

As Partículas de Ativação Lentivirais Aquaporin 1/AQP1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de AQP1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Aquaporin 1/AQP1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição AQP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Aquaporin 1/AQP1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo AQP1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.