APNG CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-435240

概要

マウスのMpgは、アルキル化プリンDNA N-グリコシラーゼ（APNG）をコードしており、塩基除去修復（BER）に関わる酵素として、3-メチルアデニンやヒポキサンチンを含む、アルキル化および脱アミノ化を受けたさまざまなプリン塩基損傷を認識して切り出します。損傷塩基の除去を開始することで、APNGは複製の正確性を維持し、内因性代謝や環境由来の遺伝毒性因子によって生じる変異原性を抑制します。APNGの活性は、損傷処理とDNA鎖の修復完了のために、APEX1、POLβ、XRCC1などの主要なBER因子と連携します。MPG/APNG機能の変化は、がん化研究に関連するゲノム不安定性の表現型や、細胞およびマウスモデルにおけるDNAアルキル化ストレスへの感受性と関連づけられています。

APNG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMpg遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Mpg内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mpgのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、APNGタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、APNGシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Mpg欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• APNGの機能に不可欠なMpgエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Mpgゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• APNG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAPNG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Mpg遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  APNG HDRプラスミド（m）および APNG HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMpgホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMpg標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。