APLNR Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402374-NIC

APLNR codifica o recetor de apelina, um recetor acoplado à proteína G da classe A que se liga aos peptídeos apelin e Elabela/Toddler para regular o desenvolvimento cardiovascular, a angiogénese e a homeostase dos fluidos nos tecidos. Após a ligação do ligando, o APLNR acopla-se predominantemente à Gαi e à sinalização dependente de β-arrestina, modulando vias como PI3K–AKT, MAPK/ERK e a sinalização de óxido nítrico, que influenciam a função endotelial e a migração celular. A desregulação da sinalização do APLNR tem sido implicada na biologia cardiometabólica e vascular, incluindo a remodelação associada à insuficiência cardíaca, a hipertensão pulmonar e a angiogénese associada a tumores, tornando-o um nó útil para dissecar a sinalização do microambiente. Em modelos celulares, a perturbação de APLNR sustenta estudos mecanísticos da dinâmica ligando–recetor, da dessensibilização/internalização do recetor e de respostas transcricionais a jusante.

APLNR O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus APLNR em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de APLNR. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função APLNR. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com APLNR interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.