APC7 Double Nickase Plasmid (m): sc-425084-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das APC7 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- APC7 Double-Nickase-Plasmid (m) und APC7 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Anapc7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: APC7: sc-365649
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
APC7 Double Nickase Plasmid (m) | sc-425084-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
APC7 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-425084-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Maus-*Anapc7* kodiert APC7, eine zentrale Tetratricopeptid-Repeat(TPR)-Untereinheit des Anaphase-Promoting-Complex/Cyclosom (APC/C), einer E3-Ubiquitin-Ligase, die den zeitgerechten Ablauf von Mitose und G1 vorantreibt, indem sie wichtige Zellzyklusregulatoren für den proteasomalen Abbau markiert. APC7 unterstützt den Zusammenbau des APC/C und die Interaktionen mit Co-Aktivatoren, die während des Spindel-Assembly-Checkpoints, beim Eintritt in die Anaphase und beim Austritt aus der Mitose die Substraterkennung koordinieren. Störungen der APC/C-Funktion können die Genomstabilität beeinträchtigen, indem sie die Chromatidtrennung und die Zuverlässigkeit von Checkpoints schwächen, und verknüpfen APC/C-Untereinheiten mit aneuploidieassoziierten Phänotypen in proliferativen Geweben. *Anapc7* wird daher in Mausmodellen häufig in Signalwegen untersucht, die die ubiquitinvermittelte Proteolyse, die Chromosomensegregation und die Zellzykluskontrolle steuern.
APC7 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Anapc7-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Anapc7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Anapc7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Anapc7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.