Antiquitin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417902

Panoramica

ALDH7A1 codifica per antiquitina, un’aldeide deidrogenasi NAD+-dipendente che partecipa al catabolismo della lisina ossidando l’α-aminoadipico semialdeide e altre aldeidi reattive correlate. Attraverso la detossificazione degli intermedi aldeidici, l’antiquitina contribuisce all’omeostasi redox cellulare e limita l’accumulo di metaboliti elettrofili che possono alterare i percorsi metabolici e quelli di risposta allo stress. Le varianti con perdita di funzione sono associate all’epilessia piridossina-dipendente, riflettendo l’alterazione della degradazione della lisina e gli effetti secondari sulla disponibilità di vitamina B6/PLP e sul metabolismo dei neurotrasmettitori. ALDH7A1 è quindi un bersaglio utile per studiare l’accoppiamento metabolico mitocondrio–citosol, la biologia dello stress da aldeidi e gli errori congeniti del metabolismo in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Antiquitin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ALDH7A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ALDH7A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ALDH7A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Antiquitin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ALDH7A1 per lo studio della segnalazione di Antiquitin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ALDH7A1 critici per la funzione di Antiquitin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ALDH7A1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Antiquitin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Antiquitin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ALDH7A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Antiquitin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Antiquitin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ALDH7A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ALDH7A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.