ANT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400680

概要

SLC25A5はアデニンヌクレオチドトランスロカーゼ2（ANT2）をコードしており、ANT2はミトコンドリア内膜に存在するキャリアとして、マトリックスと細胞質の間でADPとATPを交換し、酸化的リン酸化を細胞のエネルギー需要に結び付けます。ANT2はミトコンドリア膜電位の恒常性維持にも寄与し、透過性遷移やアポトーシスシグナル伝達を含む、バイオエネルギー、レドックスバランス、細胞生存を制御する経路と機能的に関連しています。幅広く発現するヒトのアイソフォームであり、状況依存的な制御を受けることから、ATP/ADPフラックスの変化が増殖やストレス応答に影響する増殖状態や代謝リモデリングの文脈で、ANT2はしばしば研究対象となっています。ミトコンドリアのヌクレオチド輸送やANTファミリー活性の破綻は、ミトコンドリア機能障害の表現型と関連し、がん代謝、ならびに神経筋疾患や神経変性疾患の研究領域においても検討されています。

ANT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC25A5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC25A5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC25A5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ANT2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ANT2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC25A5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ANT2の機能に不可欠なSLC25A5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC25A5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ANT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびANT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC25A5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ANT2 HDRプラスミド（h）および ANT2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC25A5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC25A5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。