ANKRD50 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412772-ACT

ヒトのANKRD50は、エンドソーム輸送および膜タンパク質のソーティングに関与するとされるアンキリンリピート含有タンパク質をコードしており、シグナル受容体やトランスポーターの空間的制御を支えます。報告されている機能から、ANKRD50は受容体リサイクリング、小胞動態、下流経路のチューニングに影響するエンドソーム関連の制御ネットワークと結び付けられており、成長因子シグナルや免疫シグナルの出力を調節する過程も含まれます。これらの役割を通じて、ANKRD50は、分化状態および増殖状態の文脈における細胞恒常性、プロテオスタシス、ならびにシグナル伝達の忠実性に関する研究に関連します。エンド膜系輸送の異常は多様な疾患機序に共通して見られる特徴であるため、ANKRD50は、輸送の破綻が細胞のシグナル状態をどのように再構成するかを解析するうえで有用な標的となります。

ANKRD50 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANKRD50の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ANKRD50 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ANKRD50 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANKRD50転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ANKRD50の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANKRD50遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるANKRD50依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANKRD50発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるANKRD50経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。