Angptl2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406130-ACT

ANGPTL2 codifica a proteína semelhante à angiopoietina 2 (Angptl2), uma glicoproteína secretada que modula as interações célula–célula e célula–matriz nos compartimentos vascular e estromal. A Angptl2 está implicada na sinalização inflamatória e no remodelamento tecidual, influenciando o comportamento endotelial, o recrutamento de leucócitos e a dinâmica da matriz extracelular por meio de vias ligadas à sinalização por integrinas, à ativação de NF-κB e a redes de citocinas. A expressão desregulada de ANGPTL2 tem sido associada à inflamação crônica, a respostas ao estresse metabólico, à fibrose e a alterações no microambiente associado a tumores, tornando-o relevante para o estudo de mecanismos que conectam inflamação à angiogênese e à renovação da matriz. In vitro, a perturbação de ANGPTL2 é comumente usada para investigar a comunicação parácrina entre células imunes, fibroblastos e células endoteliais e para mapear programas transcricionais a jusante.

Angptl2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANGPTL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Angptl2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANGPTL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANGPTL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Angptl2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANGPTL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Angptl2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Angptl2 em células tumorais com expressão de ANGPTL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.