AMPKγ2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404970-ACT

PRKAG2は、AMP/ATP活性化プロテインキナーゼ（AMPK）の制御サブユニットであるAMPKγ2をコードしており、細胞内のAMP/ATP状態を代謝適応へと結びつける中枢的なエネルギーセンサーとして機能します。AMPKγ2は、AMPK複合体の組み立てやヌクレオチド感知を調節することで、mTORC1やULK1といったシグナル伝達の要所を介し、グルコース取り込み、脂肪酸酸化、ミトコンドリア生合成、オートファジーを制御する下流経路に影響を与えます。PRKAG2は心筋および骨格筋のバイオエネルゲティクスにおいて特に重要であり、AMPKシグナルの変化は基質利用やストレス応答を転換させ得ます。PRKAG2の遺伝的変異や発現制御の破綻は、心臓の伝導異常や肥大型の表現型と関連づけられており、代謝および電気生理学的リモデリングの機序研究における標的として有用であることが示唆されています。

AMPKγ2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PRKAG2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AMPKγ2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PRKAG2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPRKAG2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AMPKγ2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPRKAG2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAMPKγ2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPRKAG2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAMPKγ2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。