Partículas Lentivirales de Activación (h) AMPK alpha 1: sc-400104-LAC

PRKAA1 codifica la subunidad catalítica AMPK alfa 1, un sensor central del estado energético que acopla los cambios en las proporciones celulares de AMP/ADP:ATP con programas de fosforilación que restablecen la homeostasis metabólica. AMPK alfa 1 regula la captación de glucosa y la glucólisis, la oxidación de ácidos grasos, la biogénesis mitocondrial y la autofagia a través de ejes de señalización que se intersecan con mTORC1, ULK1, ACC y redes transcripcionales vinculadas a PGC-1. Al integrar señales de nutrientes, hipoxia y estrés, PRKAA1 ayuda a coordinar decisiones de crecimiento celular, el equilibrio redox y la proteostasis. La señalización de AMPK desregulada se ha implicado en fenotipos de enfermedades metabólicas y se estudia ampliamente en el contexto del metabolismo de células cancerosas, la inflamación y la neurodegeneración, a medida que los investigadores exploran funciones dependientes del contexto en la adaptación al estrés.

Las partículas de activación lentiviral AMPK alpha 1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PRKAA1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral AMPK alpha 1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PRKAA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de AMPK alpha 1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PRKAA1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.