Plásmido CRISPR de Activación (m2) AMPK alpha 1: sc-430618-ACT-2

El gen murino Prkaa1 codifica la subunidad catalítica α1 de la proteína quinasa activada por AMP (AMPKα1), un sensor central del estado energético que se activa cuando aumentan los niveles de AMP/ADP para restablecer la homeostasis del ATP. AMPKα1 integra señales reguladoras aguas arriba provenientes de LKB1 y CaMKK2 y controla vías metabólicas como la oxidación de ácidos grasos, la captación de glucosa y la inhibición de programas anabólicos mediante dianas como ACC y mTORC1, además de influir en la autofagia y la biogénesis mitocondrial. La desregulación de la señalización de AMPKα1 se asocia con alteraciones en la detección de nutrientes y en las respuestas celulares al estrés, relevantes para la obesidad, la diabetes tipo 2, la esteatosis hepática, la inflamación y el metabolismo tumoral. La edición del gen Prkaa1 en modelos de ratón permite estudios mecanísticos del balance energético, de la activación y polarización de células inmunitarias y de la remodelación metabólica específica de tejidos, lo que respalda flujos de trabajo de genómica funcional en investigación de biología metabólica y del cáncer.

AMPK alpha 1 El plásmido de activación CRISPR (m2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Prkaa1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

AMPK alpha 1 El plásmido de activación CRISPR (m2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Prkaa1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Prkaa1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AMPK alpha 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Prkaa1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AMPK alpha 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AMPK alpha 1 en células tumorales con expresión de Prkaa1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.