Alox12e CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419087

概要

Alox12eは、アラキドン酸12-リポキシゲナーゼ（12R型）をコードしており、非ヘム鉄依存性のジオキシゲナーゼとして、多価不飽和脂肪酸を酸素化して生理活性脂質メディエーターを産生します。マウス表皮では、Alox12eはリポキシゲナーゼ経路の一部として機能し、角化細胞の分化および角層バリア形成を支える酸化的脂質処理において関連酵素と協調して働きます。脂質酸化産物とその下流シグナルを制御することで、Alox12eはバリア恒常性、炎症応答、皮膚のストレスシグナルに寄与します。この軸の破綻は、魚鱗癬様のバリア異常、皮膚炎に伴う炎症、さらに上皮生物学における幅広い脂質代謝表現型の研究において重要です。

Alox12e CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAlox12e遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Alox12e内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Alox12eのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Alox12eタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Alox12eシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Alox12e欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Alox12eの機能に不可欠なAlox12eエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Alox12eゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Alox12e CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAlox12e CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Alox12e遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Alox12e HDRプラスミド（m）および Alox12e HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAlox12eホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAlox12e標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。