Aldolase C Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400988

Descripción general

ALDOC codifica la aldolasa C, una isoenzima de la fructosa-bisfosfato aldolasa que cataliza un paso reversible clave en la glucólisis y la gluconeogénesis, convirtiendo la fructosa-1,6-bisfosfato en gliceraldehído-3-fosfato y fosfato de dihidroxiacetona. En los tejidos humanos, ALDOC se encuentra enriquecido en el sistema nervioso central y contribuye al metabolismo energético neuronal, acoplando el flujo glucolítico al equilibrio redox y a las demandas biosintéticas. Más allá de su función metabólica, la aldolasa C se ha vinculado con la regulación de la organización del citoesqueleto y las respuestas al estrés celular a través de redes de señalización sensibles a metabolitos. La expresión o actividad alteradas de ALDOC se estudian con frecuencia en el contexto de la vulnerabilidad neurológica y la reprogramación metabólica observadas en diversos estados patológicos, lo que proporciona un punto de entrada mecanístico para el análisis de vías en modelos celulares y tisulares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Aldolase C (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ALDOC en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ALDOC junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ALDOC tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Aldolase C.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ALDOC para la investigación de la señalización de Aldolase C, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ALDOC críticos para la función de Aldolase C
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ALDOC para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Aldolase C CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Aldolase C CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ALDOC. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Aldolase C (h) y el plásmido HDR Aldolase C (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ALDOC para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ALDOC definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.