Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406757

概要

ALDH5A1は、コハク酸セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ（SSADH）をコードしており、これはミトコンドリアに局在するNAD+依存性酵素で、コハク酸セミアルデヒドをコハク酸へ酸化する反応を触媒します。この反応により、GABA（γ-アミノ酪酸）の分解代謝がトリカルボン酸（TCA）回路へと連結されます。GABAシャントを介したフラックスを制御することで、ALDH5A1は細胞のレドックスバランス、ミトコンドリア代謝、ならびに神経組織における神経伝達物質のターンオーバーの調節に寄与します。SSADH活性の障害は、GABA由来代謝産物の蓄積や抑制性シグナル伝達の変化と関連しており、ALDH5A1は神経系に影響する先天代謝異常の文脈でも研究されてきました。これらの特徴により、ALDH5A1はミトコンドリア機能と神経伝達物質経路の間の代謝クロストークを解明するための有用な標的となります。

Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるALDH5A1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ALDH5A1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ALDH5A1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ALDH5A1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1の機能に不可欠なALDH5A1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ALDH5A1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ALDH5A1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 HDRプラスミド（h）および Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはALDH5A1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のALDH5A1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。