Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-431814

概要

マウスのAldh4a1は、プロリンおよびヒドロキシプロリン分解代謝の最終段階において、Δ1-ピロリン-5-カルボキシレートをグルタミン酸へ変換するミトコンドリア酵素であるアルデヒド脱水素酵素4-A1（P5CDH/ALDH4A1）をコードします。プロリン代謝、グルタミン酸産生、ならびにミトコンドリアのレドックスバランスの間のフラックスを制御することで、ALDH4A1はアミノ酸恒常性や反応性アルデヒドの解毒に影響を与えます。この経路の攪乱は、酸化ストレス応答の変化やミトコンドリア機能障害と関連しており、Aldh4a1は代謝ストレス応答を研究する上で有用な結節点となります。さらに、ALDH4A1活性は、グルタミン酸依存的なTCA回路への流入を介して、より広範な栄養感知やアナプレロティック（補充）過程とも結びついています。

Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAldh4a1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Aldh4a1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Aldh4a1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Aldh4a1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1の機能に不可欠なAldh4a1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Aldh4a1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Aldh4a1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 HDRプラスミド（m）および Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAldh4a1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAldh4a1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。