Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419080

Panoramica

Aldh3a1 codifica l’aldeide deidrogenasi 3-A1 (ALDH3A1), un enzima dipendente da NAD(P)+ che ossida aldeidi alifatiche e aromatiche reattive generate durante la perossidazione lipidica e il metabolismo degli xenobiotici. Detossificando aldeidi elettrofile e contribuendo all’omeostasi redox, ALDH3A1 sostiene le difese cellulari contro lo stress ossidativo e carbonilico e interagisce con le vie di risposta allo stress legate al glutatione. Nei tessuti murini, l’attività di ALDH3A1 è stata associata alla protezione dei compartimenti epiteliali esposti a insulti ambientali e metabolici, fornendo indicazioni per studi su infiammazione, stress correlato all’invecchiamento e carcinogenesi, in cui il carico di aldeidi è elevato. Alterazioni della funzione della famiglia ALDH sono frequentemente analizzate in modelli di disfunzione metabolica e biologia tumorale per il loro impatto sulla capacità di detossificazione e sulla tolleranza allo stress cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Aldh3a1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Aldh3a1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Aldh3a1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Aldh3a1 per lo studio della segnalazione di Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Aldh3a1 critici per la funzione di Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Aldh3a1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Aldh3a1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Aldh3a1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Aldh3a1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.