Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400809-NIC

ALDH2 codifica l'enzima mitocondriale aldeide deidrogenasi 2, un catalizzatore chiave nell'ossidazione NAD(P)+-dipendente delle aldeidi reattive generate dal metabolismo dell'etanolo e dalla perossidazione lipidica. Eliminando l'acetaldeide e le aldeidi tossiche derivate dai lipidi, come il 4-idrossinonenale, ALDH2 sostiene l'equilibrio redox mitocondriale, limita lo stress ossidativo e protegge proteine e membrane dalla formazione di addotti con le aldeidi. L'attività di ALDH2 si interfaccia con il controllo di qualità mitocondriale, la segnalazione mediata da ROS e vie più ampie del metabolismo degli xenobiotici e del metabolismo intermedio. Alterazioni della funzione di ALDH2 sono state associate a una diversa suscettibilità al danno cellulare indotto dalle aldeidi e vengono spesso studiate in contesti quali lo stress tissutale correlato all'alcol, fenotipi cardiometabolici e meccanismi di malattie neurodegenerative.

Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ALDH2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ALDH2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ALDH2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ALDH2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.