Plasmide CRISPR d'Activation (h) Akt2: sc-400060-ACT

AKT2 code la kinase sérine/thréonine Akt2, un effecteur clé de la signalisation dépendante de PI3K qui relie la stimulation par les facteurs de croissance au métabolisme cellulaire, à la survie et à la prolifération. Akt2 phosphoryle des substrats qui régulent l’absorption du glucose, la synthèse du glycogène, le métabolisme lipidique et la progression du cycle cellulaire, avec des rôles majeurs dans la signalisation de l’insuline et le contrôle de la voie mTOR. En biologie humaine, une activité altérée d’AKT2 a été associée à une dérégulation de l’homéostasie métabolique et à des circuits de signalisation oncogéniques qui modulent la croissance cellulaire et la résistance au stress. En tant que nœud de voie intégrant les signaux des récepteurs tyrosine kinases avec des programmes transcriptionnels et métaboliques en aval, AKT2 est largement étudié dans des modèles de résistance à l’insuline, de biologie des adipocytes et de signalisation des cellules tumorales.

Akt2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AKT2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Akt2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AKT2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AKT2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Akt2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AKT2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Akt2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Akt2 dans les cellules tumorales présentant une expression de AKT2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.