Akp-5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419070

概要

Alppl2 は、マウスのアルカリホスファターゼ・アイソフォームである Akp-5 をコードしており、細胞表面に存在するグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型のエクト酵素として、細胞外ヌクレオチドやその他のリン酸モノエステルを脱リン酸化します。局所的なリン酸の利用可能性やプリン作動性シグナル伝達の中間体を調節することで、Akp-5 は膜関連の代謝過程、上皮の分化プログラム、ならびに細胞間相互作用に影響する微小環境シグナルに作用し得ます。Alppl2 の発現は発生段階や系譜アイデンティティに関連する状況で報告されており、分化や組織リモデリングの研究においてマーカーとして、また機能的ハブとして有用です。アルカリホスファターゼ活性の異常は、細胞成熟の変化やストレス応答との関連でしばしば検討されるため、異常な増殖制御や疾患関連表現型のモデルにおける Alppl2 の解析が支持されます。

Akp-5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAlppl2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Alppl2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Alppl2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Akp-5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Akp-5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Alppl2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Akp-5の機能に不可欠なAlppl2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Alppl2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Akp-5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAkp-5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Alppl2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Akp-5 HDRプラスミド（m）および Akp-5 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAlppl2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAlppl2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。