Akp-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419069

Panoramica

Akp3 codifica la fosfatasi alcalina 3 del topo (Akp-3), un ectoenzima ancorato tramite glicosilfosfatidilinositolo (GPI) che idrolizza monoesteri fosfatici sulla superficie cellulare e in compartimenti extracellulari. De-fosforilando nucleotidi e altri fosfometaboliti, Akp-3 può influenzare la disponibilità locale di fosfato, il tono della segnalazione purinergica e, più in generale, l’omeostasi metabolica. L’attività della fosfatasi alcalina è comunemente associata alla differenziazione epiteliale e a funzioni di barriera e di assorbimento specifiche dei tessuti, a supporto di studi di fisiologia d’organo e dei programmi di maturazione cellulare. Alterazioni dell’espressione o dell’attività della fosfatasi alcalina sono spesso utilizzate come readout in modelli di infiammazione, disregolazione metabolica e patologie associate alla differenziazione, rendendo Akp3 un bersaglio rilevante per indagini meccanicistiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Akp-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Akp3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Akp3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Akp3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Akp-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Akp3 per lo studio della segnalazione di Akp-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Akp3 critici per la funzione di Akp-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Akp3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Akp-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Akp-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Akp3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Akp-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Akp-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Akp3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Akp3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.