Akp-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419069

概要

Akp3は、マウスのアルカリホスファターゼ3（Akp-3）をコードしており、細胞表面および細胞外区画でリン酸モノエステルを加水分解する、グリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型のエクト酵素です。ヌクレオチドやその他のリン酸化代謝物を脱リン酸化することにより、Akp-3は局所的なリン酸の利用可能性、プリン作動性シグナル伝達のトーン、さらには広範な代謝恒常性に影響を与え得ます。アルカリホスファターゼ活性は、上皮分化や組織特異的なバリア機能・吸収機能と関連づけられることが多く、臓器生理や細胞成熟プログラムの研究を支えています。アルカリホスファターゼの発現や活性の変化は、炎症、代謝異常、分化関連病態のモデルにおいてしばしば指標として用いられるため、Akp3は機序解明の研究対象として重要です。

Akp-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAkp3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Akp3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Akp3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Akp-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Akp-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Akp3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Akp-3の機能に不可欠なAkp3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Akp3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Akp-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAkp-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Akp3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Akp-3 HDRプラスミド（m）および Akp-3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAkp3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAkp3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。