AKAP 79 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402647-ACT

ヒトのAKAP5は、A-キナーゼアンカリングタンパク質79（AKAP79）をコードしており、膜関連の足場（スキャフォールド）タンパク質として、PP2B／カルシニューリンやPKCを含む主要なシグナル伝達酵素とともにPKAを空間的に配置し、刺激依存的なリン酸化を制御します。これらの複合体を受容体やイオンチャネル近傍に係留することで、AKAP79は区画化されたcAMPおよびCa2+依存性シグナル伝達、シナプス可塑性、ならびに興奮性シナプスの活動依存的リモデリングを調節します。AKAP79に関連するシグナル伝達は、AMPA受容体およびNMDA受容体の機能や、神経細胞の興奮性を制御する下流の転写プログラムにも影響を及ぼします。AKAP5に連結したシグナル伝達ハブの破綻は、シナプスシグナルやCa2+／cAMP経路のバランス変化が病態に関与する神経疾患・精神疾患のメカニズムに関連すると示唆されています。

AKAP 79 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AKAP5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AKAP 79 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AKAP5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAKAP5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AKAP 79の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAKAP5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAKAP 79依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAKAP5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAKAP 79経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。