Plasmide Double Nickase (h) AKAP 7: sc-406308-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AKAP 7 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AKAP 7 Double Nickase (h) et le plasmide AKAP 7 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AKAP7. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AKAP 7 Antibody (1F9): sc-517021
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AKAP 7 | sc-406308-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AKAP 7 | sc-406308-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AKAP7 code la protéine d’ancrage de l’A‑kinase 7, un échafaudage qui contraint spatialement la signalisation de la protéine kinase A (PKA) dépendante de l’AMPc en arrimant la PKA à des compartiments subcellulaires distincts. En organisant des microdomaines de signalisation locaux, AKAP7 contribue à la dynamique temporelle et à la spécificité des événements de phosphorylation qui influencent la régulation des canaux ioniques, la gestion du calcium et, plus largement, les interactions entre voies de second messager. Cette compartimentation relie AKAP7 à des processus tels que le couplage excitation–contraction, la dynamique membranaire dépendante des signaux et des réponses transcriptionnelles contrôlées par la phosphorylation. Un ancrage AKAP–PKA dérégulé a été associé à des états de signalisation cellulaire altérés pertinents pour des phénotypes cardiométaboliques et neurophysiologiques, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la fidélité de la signalisation.
AKAP 7 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AKAP7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AKAP7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AKAP7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AKAP7.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.