AKAP 7 Double Nickaseプラスミド (h): sc-406308-NIC

AKAP7はA-キナーゼアンカリングタンパク質7をコードしており、PKAを特定の細胞内コンパートメントに係留することで、cAMP依存性プロテインキナーゼA（PKA）シグナル伝達を空間的に制限する足場（スキャフォールド）タンパク質である。局所的なシグナル伝達マイクロドメインを組織化することで、AKAP7はイオンチャネル制御、カルシウム動態、さらにはセカンドメッセンジャー経路間のクロストークに影響するリン酸化イベントのタイミングと特異性に寄与する。このような区画化により、AKAP7は興奮収縮連関、シグナル依存的な膜動態、リン酸化制御を介した転写応答などの過程と結び付けられる。AKAP–PKAの係留が破綻すると、心代謝系および神経生理学的表現型に関連する細胞内シグナル状態の変化と関連することが示されており、シグナル伝達の忠実性に関する機構研究の標的として有用であることを支持している。

AKAP 7 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AKAP7 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AKAP7内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AKAP7の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AKAP7が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。