AIRE-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401225

Übersicht

Der Autoimmunregulator (AIRE; AIRE-1) ist ein nukleärer transkriptioneller Regulator, der die zentrale Immuntoleranz aufrechterhält, indem er die ektope Expression gewebespezifischer Antigene in medullären thymischen Epithelzellen fördert. Dadurch werden die negative Selektion ermöglicht und das T‑Zell-Repertoire geprägt. AIRE koordiniert chromatin- und transkriptionsassoziierte Prozesse durch Interaktionen mit Histonmarkierungen und der Transkriptionsmaschinerie und unterstützt so Genexpressionsprogramme, die mit der thymischen Selektion und der Immunhomöostase verknüpft sind. Eine Störung der AIRE-Funktion ist mit einem Zusammenbruch der Toleranz und Autoimmunität assoziiert, und veränderte AIRE-abhängige Transkriptionsprogramme wurden im Kontext entzündlicher Phänotypen und Immunfehlregulation untersucht. Daher wird AIRE häufig als Modell-Lokus genutzt, um die transkriptionelle Kontrolle, die Biologie der Antigenpräsentation und Mechanismen der Selbsttoleranz zu untersuchen.

Das AIRE-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AIRE-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AIRE-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AIRE nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AIRE-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AIRE-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AIRE-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AIRE-Exone abzielen, die für die AIRE-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AIRE-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AIRE-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom AIRE-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AIRE-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AIRE-1 HDR-Plasmid (h) und AIRE-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AIRE-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AIRE-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.