AGS3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402802-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- AGS3O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase AGS3 (h) e o Plasmídeo Double Nickase AGS3 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GPSM1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:AGS3 Anticorpo (G-2): sc-271721
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
AGS3 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-402802-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AGS3 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-402802-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPSM1 codifica o ativador da sinalização por proteína G 3 (AGS3), um regulador multidomínio que se liga às subunidades Gαi/o e modula o ciclo das proteínas G heterotriméricas de forma independente da ativação clássica por GPCRs. Por meio dos seus motivos TPR e GPR/GoLoco, o AGS3 atua como proteína de ancoragem (scaffold) de complexos de sinalização que influenciam a dessensibilização de receptores, o tráfego vesicular e processos associados à polaridade, integrando sinais das redes de cAMP/PKA e de pequenas GTPases. A atividade do AGS3 tem sido associada ao controlo da migração celular e de programas de diferenciação, e alterações na expressão de GPSM1 ou no equilíbrio da sua sinalização foram relatadas em contextos de neurobiologia e de reprogramação da sinalização associada a tumores. Essas propriedades tornam o GPSM1 um alvo útil para dissecar a comunicação cruzada (crosstalk) entre vias reguladas por proteínas G e identificar efetores a jusante que moldam o estado celular.
AGS3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GPSM1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GPSM1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GPSM1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GPSM1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.